La trama describe la historia del Rey Espartano Leonidas - Gerard Butler y sus 300 guerreros espartanos que pelearon a muerte contra el Dios-Rey Persa Jerjes - Rodrigo Santoro y su armada de mas de un millon de soldados. Debido al furor de la batalla la reina espartana Gorgo - Lena Headey intento conseguir el apoyo de Esparta para su marido incitando al Senado Espartano que el rey moriria si no enviaban a la armada. La historia es enmarcada por un narracion en off del soldado Espartano Dilios - David Wenham. A traves de esta tecnica narrativa varias criaturas fantasticas se introducen colocando a 300 dentro del genero de la fantasia historica.